Konstruksi Single Disruptant Penggantian Gen Target dari Ragi Saccharomyces cerevisiae dengan Metode Polymerase Chain Reaction (PCR)

Hermansyah Hermansyah

Abstract


Konstruksi suatu single disruptant merupakan langkah penting dalam mempelajari fungsi suatu gen dari S. cerevisiae. Dalam studi ini kami mengkonstruksi transforman dengan menghilangkan gen PPG1 pengkode protein fosfatase non essential untuk pertumbuhan, tapi terlibat dalam pengendalian akumulasi glikogen dan diduga berperan dalam proses meiosis pada pertumbuhan sel. Konstruksi ppg1_::CgHIS3 single disruptant ini menggunakan metode penggantian gen target (PPG1) dengan suatu marker auksotrop Candida albicans HIS3 yang diamplifikasi menggunakan Polymerase Chain Reaction (PCR) atau disebut PCR mediated disruption. Transforman yang tumbuh di media selektif tanpa histidin dilakukan konfirmasi dengan menggunakan amplifikasi PCR. Hasil elektroforesis gel agarosa 1% menunjukkan bahwa transforman ppg1_::CgHIS3 memiliki pita berukuran 3,3 kb, sedangkan wild type strain memiliki pita berukuran 2,6 kb jika diamplifikasi menggunakan forward primer dan reverse primer yang masing-masing terletak −1000 hingga −979 downstream dan +480 hingga +500 upstream dari urutan PPG1.


Full Text:

PDF

References


Sherman, F., 2002, Getting started with yeast, Methods Enzymol, 350:3-41

Miyakawa, T. dan M. Mizunuma, 2007, Physiological roles of calcineurin in Saccharomyces cerevisiae with special emphasis on its roles in G2/M cell-cycle regulation, Biosci Biotechnol Biochem, 71:604951-6049513

Hirasaki, M., Y. Kaneko, dan S. Harashima, 2008, Protein phosphatase Siw14 controls intracellular localization of Gln3 in cooperation with Npr1 kinase in Saccharomyces cerevisiae, Gene 409:34-43

Posas, F. dan H. Saito, 1998, Activation of the yeast SSK2 MAP kinase kinase kinase by the SSK1 two component response regulator, EMBO J. 17:1385-1394

Hermansyah, M. Sugiyama, Y. Kaneko, dan S. Harashima, 2009, Yeast protein phosphatase Ptp2p and Msg5p are involved in G1-S transition, CLN2 transcription and vacuole morphogenesis, Arch Microbiol, 191:721-733

Sambrook, J., E.F. Fritsch, dan T. Maniatis, 1989, Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York

Sakumoto, N., Y. Mukai, K. Uchida, T. Kouchi, J. Kuwajima, Y. Nakagawa, S. Sugioka, E. Yamamoto, T. Furuyama, H. Mizubuchi, N. Ohsugi, T. Sakuno, K. Kikuchi, I. Matsuoka, N. Ogawa, Y. Kaneko, dan S. Harashima, 1999, A series of protein phosphatase gene disruptants in Saccharomyces cerevisiae, Yeast, 15:1669-1679

Sakumoto, N., I. Matsuoka, Y. Mukai, N. Ogawa, Y. Kaneko, dan S. Harashima, 2002, A series of double disruptants for protein phosphatase genes in Saccharomyces cerevisiae and their phenotypic analysis, Yeast, 19:587-599

Kitada, K., E. Yamaguchi, dan M. Arisawa, 1995, Cloning of the Candida glabrata TRP1 and HIS3 genes, and construction of their disruptant strains by sequential integrative transformation, Gene, 165:203-206

Philippsen, P., K. Kleic, Pohlmann, Dusterhoft, K. Hamberg, J.H. Hagemann, B. Obermaler, L.A. Urrestarazu, R. Aert, K. Albermann, R. Altmann, B. Andre, V. Baladron, J.P. Ballesta, A.M. Becam, J. Beinhaver, J. Boskovic, M.J. Butrago, F. Bussereau, F. Costei, M. Croutzet, M. Dangelo, K. Dalpero, A. De Antoni, dan J. Han, 1997, The nucleotide sequence of Saccharomyces cerevisiae chromosome XIV and its evolutionary implications, Nature 387:93-8




DOI: https://doi.org/10.36706/jps.v12i3.170

Refbacks

  • There are currently no refbacks.


   

  

 

 

Creative Commons License

Jurnal Penelitian Sains (JPS) Published by UP2M, Faculty of Mathematic and Natural Science Sriwijaya University is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.

 

View My Stats